制備單克隆抗體的免疫抗原，從純度上說雖不要求很高，但高純度的抗原使得到所需單抗的機會增加，同時可以減輕篩選的工作量。因此，免疫抗原是越純越好，應(yīng) 根據(jù)所研究的抗原和實驗室的條件來決定。一般來說，抗原的來源有限，或性質(zhì)不穩(wěn)定，提純時易變性，或其免疫原性很強，或所需單抗是用于抗原不同組分的純化 或分析等，免疫用的抗原只需初步提純甚至不提純，但抗原中混雜物很多，特別是如果這些混雜物的免疫原性較強時，則必須對抗原進行純化。檢測用抗原可以是與 免疫抗原純度相同，也可是不同的純度，這主要決定于所用篩檢方法的種類及其特異性和敏感性。
多抗具有增強機體免疫功能和激活吞噬細胞，升高外周白細胞的作用，能提高骨髓造血機能和機體應(yīng)激能力。
1、免疫
用生理鹽水稀釋免疫原，然后與相應(yīng)的佐劑進行1:1混合。抗原和佐劑*混合形成穩(wěn)定的乳劑，將該乳劑在兔子雙肩周圍的皮膚下進行皮下注射和后大腿進行肌肉注射。每個區(qū)域大約用1/4的免疫原。這樣免疫原可以持久存在從而提高免疫應(yīng)答。
注：
抗原注射以前需要收集一些正常血清，已備檢測抗體時作為陰性對照。待兔子在新環(huán)境中穩(wěn)定，大概需要四天左右時間，可以進行耳動脈取血。取血量約5ml足矣。
免疫用的抗原必須純化，否則影響抗體的質(zhì)量。抗原經(jīng)FCA或FIA充分乳化后才能注射。將抗原液與佐劑等比例混合后，置于混合器上使之劇烈振蕩使抗原充分乳化，乳化過程比較費時、費力，但若乳化不充分，會影響免疫的效果，振蕩后，1000rpm離心一分鐘，如水相和油相不分層即可注射。免疫用FCA，以后都用FIA。
免疫方法可采用背部多點注射法。即于家兔脊柱兩旁選4-6點皮下注射，每點注0.1ml，間隔2周后再于上述部位選不同點注射（不要選擇臨近位點，否則潰瘍愈合不好）。每次免疫的抗原量約100μg。免疫次數(shù)在四五次即可，抗原用量大可以減少次數(shù)。
2、取血：
免疫一周后，可以耳動脈取血檢測抗體效價。因為起初幾次免疫產(chǎn)生的抗體的效價比較低，頭兩次取血，夠檢測用即可。在三次免疫后，可以獲得較價的抗體，每次取血量可以在40ml，不要取太多，否則會造成兔子貧血。
前幾次取血用19號針頭對兔子進行耳動脈取血，室溫過夜析出血清。
一次取血可以采用頸動脈放血，具體操作如下：
(1)、家兔仰臥于兔架上固定頭部，用紗布固定四肢。頭部略放低以暴露頸部。剃毛并消毒皮膚。
(2)、沿頸部中線用手術(shù)刀切開皮膚約250px，分離皮下結(jié)締組織，直至暴露出氣管兩側(cè)的胸鎖乳突肌（小心操作，如碰到小血管出血，可用止血鉗止血）。
(3)、用直頭止血鉗分離胸鎖乳突肌與氣管間的頸三角區(qū)疏松組織，暴露出頸總動脈后用彎頭眼科鑷使之游離，剝離神經(jīng)和結(jié)締組織。
(4)、于動脈下套入兩根黑絲線，分別置于遠心及近心端。結(jié)扎遠心端的絲線。近心端的動脈用血管夾夾住。
(5)、用小拇指墊在血管下，用尖頭眼科手術(shù)剪在兩根絲線間的動脈璧上剪一小口（勿剪斷），插入塑料放血管。再將近心端的絲線結(jié)扎固定于放血管上，以防放血管滑脫。
(6)、松開止血鉗，使血液流入容器中。一般一只家兔可放血100-120ml。
3、血清的分離
如果用三角瓶或平皿盛血，將器皿傾斜放置于37oC烘箱2h，轉(zhuǎn)移到4oC沉淀過夜，第二天早上用吸管吸取血清。如果用離心管收集，37oC烘箱放置2h，轉(zhuǎn)移到4oC沉淀過夜，第二天早上離心，10000RCF，10分鐘。在血清中加入NaN3 至終濃度0.02%，分裝后-20oC保存。
雜交瘤細胞在融合后2周左右即可篩選，即把分泌所需抗體的雜交瘤孔從眾多的孔中選出來，通常也稱為抗體檢測。抗體檢測的方法很多，通常根據(jù)所研究的抗原和 實驗室的條件而定。但作為雜交瘤篩選的抗體檢測方法必須具有快速、準備、簡便，便于一次處理大量樣品等特點。因為往往有幾百個樣品需要在短短幾個小時就報 告結(jié)果，以便決定雜交瘤細胞的取舍。所以選用抗體檢測方法的原則是快速、敏感、特異、可靠、花費小和節(jié)省人力。一般說來，在融合之前就必須建立好抗體檢測 方法，并克服可能存在的問題。
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更新時間：2021-06-21
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