子曾經(jīng)曰過(guò)“知己知彼，百戰(zhàn)不殆"，很多科研工作者對(duì)實(shí)驗(yàn)技能出神入化，但對(duì)所使用的試劑生產(chǎn)和應(yīng)用知之甚少，導(dǎo)致買(mǎi)到不合適或jiamao偽劣的產(chǎn)品，對(duì)時(shí)間和經(jīng)費(fèi)造成極大的損失浪費(fèi)，所以選擇合適的抗體，事半功倍。

一.抗體種屬來(lái)源的選擇

有人認(rèn)為單抗比多抗好，其實(shí)這并不是一個(gè)嚴(yán)謹(jǐn)?shù)挠^點(diǎn)，只能說(shuō)在可能性上單抗的特異性更好一些，而多抗的親和力會(huì)優(yōu)于單抗，并且特異性并不一定就遜于單抗，主要看抗原的設(shè)計(jì)水平。目前商品化抗體里單抗主要是鼠單抗、兔單抗，多抗主要是兔多抗、山羊多抗等，其他種屬來(lái)源抗體較少。不建議糾結(jié)于單抗好還是多抗好，能做出實(shí)驗(yàn)的抗體就是好抗體。

在選擇上一般建議實(shí)驗(yàn)種屬和抗體種屬親緣性越遠(yuǎn)越好，不宜同源。抗體不同種屬會(huì)要影響接下來(lái)二抗的選配。特別是在免疫熒光雙標(biāo)實(shí)驗(yàn)中，需要在區(qū)別于實(shí)驗(yàn)種屬的基礎(chǔ)上，區(qū)分開(kāi)兩個(gè)指標(biāo)的抗體種屬來(lái)源，以便于二抗區(qū)別識(shí)別。

二.關(guān)于特異性的選擇

特異性的選擇主要需要考慮四個(gè)方面：蛋白特異性、種屬特異性、實(shí)驗(yàn)方法特異性、標(biāo)記物的特異性。

（1）蛋白特異性

針對(duì)需要檢測(cè)的蛋白查找抗體，幾個(gè)細(xì)節(jié)要區(qū)分，重組表達(dá)的蛋白和內(nèi)源性蛋白的檢測(cè)，對(duì)抗體的要求是不一樣的，注意查看抗體說(shuō)明書(shū)的檢測(cè)說(shuō)明。如果重組蛋白不是全長(zhǎng)表達(dá)，則需要注意抗體的免疫原區(qū)域是否在重組蛋白區(qū)域內(nèi)。內(nèi)源性蛋白最好能清楚其剪切與修飾的方式，特殊表型的蛋白需要進(jìn)行序列比對(duì)，并結(jié)合抗體免疫原序列，查看交叉反應(yīng)的情況。磷酸化蛋白檢測(cè)需要確定具體位點(diǎn)，不同位點(diǎn)的磷酸化意味著可能有不同的機(jī)制存在，不宜一概而論。

（2）種屬特異性

同種蛋白不同物種，有著或大或小的差異。目前大部分商品化抗體都是以人源蛋白序列為模板重組蛋白或設(shè)計(jì)多肽抗原的，根據(jù)蛋白的同源性情況與其他種屬發(fā)生交叉反應(yīng)。需要參照說(shuō)明書(shū)注明的可反應(yīng)種屬信息。一些稀有種屬很難找到抗體，可以通過(guò)蛋白的序列比對(duì)，選擇同源序列免疫的抗體，不過(guò)一般這種情況生產(chǎn)商不會(huì)受理其關(guān)于質(zhì)量的申訴，如果可以申請(qǐng)到免費(fèi)的抗體樣品，則利于抗體選擇。

（3）實(shí)驗(yàn)方法特異性

目前使用抗體的實(shí)驗(yàn)方法有很多，不同的使用方法過(guò)程中，因?yàn)閷?duì)蛋白樣品的處理方式不一樣，蛋白的含量有差異，對(duì)抗體的識(shí)別表位和效價(jià)要求都是不一樣的。具體的根據(jù)說(shuō)明書(shū)注明的產(chǎn)品應(yīng)用方法進(jìn)行選擇。但是生產(chǎn)商一般不會(huì)將每個(gè)抗體都進(jìn)行各種實(shí)驗(yàn)的檢測(cè)，目前檢測(cè)比較多的只是WB、IHC、IF等，如果針對(duì)具體的實(shí)驗(yàn)方法沒(méi)有找到合適的抗體的，可以結(jié)合蛋白序列分析和抗體的抗原信息，選擇盡可能有效果的抗體。同樣，申請(qǐng)到免費(fèi)的抗體樣品是個(gè)很好的途徑。

（4）標(biāo)記物的特異性

一般基于實(shí)驗(yàn)操作的實(shí)驗(yàn)方法不會(huì)使用帶有標(biāo)記的一抗，比如WB、IHC等，都是通過(guò)二抗類(lèi)的試劑標(biāo)記達(dá)到結(jié)果呈現(xiàn)的目的。但是基于儀器分析的一些實(shí)驗(yàn)，可能就會(huì)使用到直接標(biāo)記的一抗，比如流式實(shí)驗(yàn)。那么需要了解到自己將要使用的儀器能檢測(cè)到的熒光范圍，針對(duì)不通的參數(shù)要求選擇對(duì)應(yīng)的標(biāo)記物。在免疫熒光雙標(biāo)實(shí)驗(yàn)中，需要選配不同的熒光標(biāo)記物。

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